配置緩沖液的方法與技巧
更新時(shí)間：2023-08-29 點(diǎn)擊次數(shù)：1738次
今天，艾偉拓團(tuán)隊(duì)要向您推薦一款操作簡(jiǎn)便且復(fù)現(xiàn)性較好的緩沖液配制方法：
使用氨丁三醇（Tris）及鹽酸氨丁三醇（Tris-HCl）固體粉末進(jìn)行配制。
Tris緩沖體系被廣泛應(yīng)用生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)過(guò)程中，例如目前已上市的兩款mRNA xin'guan疫苗均選用Tris/Tris-HCl作為其制劑緩沖體系，此外該緩沖體系還廣泛用于抗體蛋白純化等生物制劑生產(chǎn)環(huán)節(jié)。
使用時(shí)，可根據(jù)目標(biāo)濃度及pH，計(jì)算并直接稱取兩種固體粉末混合，溶解定容，至于兩種固體粉末的用量如何確認(rèn)，您可以參考以下實(shí)驗(yàn)步驟以及艾偉拓實(shí)驗(yàn)室實(shí)測(cè)值，通過(guò)一個(gè)簡(jiǎn)單的預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)：
1. 分別配制目標(biāo)濃度的Tris與Tris-HCl（這里以0.1mol/L為例）
2.兩種溶液分別取不同體積混合成相同體積（這里以100mL為例）的緩沖液，測(cè)定溶液pH
待摸索出兩種溶液適宜比例后，根據(jù)計(jì)劃配置的緩沖液體積，倒算兩種固體粉末的用量。
基于該方法，我們復(fù)現(xiàn)了Moderna的新冠mRNA疫苗中的Tris緩沖溶液，pH理論值為7~8，實(shí)測(cè)值為7.47（注：該實(shí)測(cè)值為溶液中僅包含Tris/Tris-HCl，不含mRNA-LNP及其他輔料情況下的pH值）。
該方法的優(yōu)勢(shì)是操作簡(jiǎn)便，只需稱取及溶解兩步，在外界溫度及溶液濃度相同的情況下，復(fù)現(xiàn)性較好，且無(wú)需使用濃鹽酸等嚴(yán)格受限的試劑。
使用該方法配置Tris/Tris-HCl緩沖液的注意事項(xiàng)如下：
①濃度及溫度對(duì)Tris緩沖液pH均有較大影響，建議做上述實(shí)驗(yàn)時(shí)，保持與實(shí)際使用場(chǎng)景相同的溫度與濃度，并在配置完成后第一時(shí)間進(jìn)行測(cè)量，避免二氧化碳的干擾。
②若變更使用濃度或環(huán)境溫度，需重新進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)。
③為避免Tris-HCl含量波動(dòng)等因素造成配置的緩沖液pH不穩(wěn)定，建議采購(gòu)質(zhì)量可靠的藥用級(jí)Tris及Tris-HCl產(chǎn)品。
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